Microscopie date du 17ème siècle où Hooke et Malpighi lentilles simples employées dans l'étude de diverses caractéristiques structurelles. Entre 1673 et 1716, Leeuwenhoek développés lentilles composées, et par le début du 19e siècle, le microscope composé était devenu très sophistiqué.
Utilité de tout type de microscope ne dépend pas seulement de sa capacité à magnifier mais aussi de sa capacité à régler les détails. Au-delà de certaines limites, grossissement ajoute pas de nouveaux détails. Le grossissement utile d'un microscope à lumière ordinaire est d'environ 1500 x. Pouvoir de résolution est une mesure de la capacité du microscope pour séparer clairement deux points rapprochés. Au-delà du pouvoir de résolution de n'importe quel microscope deux points apparaissent comme un seul. La résolution avec système de lentilles est limité par la longueur d'onde de la lumière et par l'ouverture numérique ou la capacité de collecte de la lumière d'un objectif. Le pouvoir de résolution d'un microscope construit meilleure lumière et d'environ 0,2 micron.
Préparation des tissus:
les cellules, tissus et organes ne peuvent être étudiées correctement, sauf si elles sont convenablement préparés pour l'examen microscopique. Deux méthodes sont utilisées pour la préparation des tissus
• Les méthodes impliquant l'observation directe des cellules vivantes.
• Les méthodes employées avec les cellules mortes.
Les cellules vivantes sont généralement plus difficiles à manipuler et sont disponibles pour une courte période seulement. Mais il est important que l'on doive être conscient des méthodes par lesquelles les cellules vivantes peuvent être observées et de comprendre les façons dont ils diffèrent des cellules fixes. Dans les cellules vivantes, la structure et les fonctions peuvent être étudiés simultanément. Les cellules vivantes peuvent être vus se déplaçant, l'ingestion de corps étrangers, parfois diviser, et portant sur d'autres fonctions.
Observation des tissus vivants:
les organismes unicellulaires et les cellules libres peuvent occasionnellement être étudiés directement au microscope pendant qu'ils sont encore vivants. Cellules libres sont incolores et structures au sein de leur manque de contraste. Cette difficulté peut être surmontée en utilisant un microscope à contraste de phase. Cellules sanguines humaines sont facilement obtenus et peuvent être étudiés dans des films tout en étant entouré par le plasma, leur environnement naturel.
Conservation prolongée des cellules vivantes en dehors du corps peut être réalisé par une technique connue sous le nom de culture de tissus. Des fragments de tissus sont prélevés de façon aseptique, transférés dans un milieu physiologique et maintenu à une température normale pour l'animal dont les tissus ont été prélevés. La culture est placée dans le récipient en verre mince ou sur un couvercle en verre monté sur une lame de verre creux. De cette façon, ils sont disponibles pour l'observation sous microscope. En culture, une telle croissance, la multiplication et dans certains cas, la différenciation des cellules en cellules de type d'autres peuvent être observés directement. La culture de tissus est une méthode utile pour l'étude du cancer et de l'activité de nombreux virus.
Deux méthodes de coloration ont été appliquées avec succès à des animaux vivants ou de cellules survivantes.
Coloration vitale:
dans ce cas, les teintures sont injectées dans les animaux vivants. L'activité de certaines cellules se traduira par l'absorption sélective des matières colorantes par ces cellules, par exemple coloration des macrophages par le bleu trypan, sur la base de leur capacité à phagocyter les particules étrangères.
Coloration Surpravital:
il implique l'addition d'un colorant dans un milieu de cellules déjà retiré de l'ex-organisme coloration des mitochondries dans les cellules vivantes par Janus vert, du lysosome par le rouge neutre et fibres nerveuses et des cellules par le bleu de méthylène.
Préparation des tissus morts:
le moyen le plus pratique pour étudier l'histologie est d'utiliser des sections, dont chacune est plus ou moins une préparation permanente. Une section est préparé par découpe une fine tranche à partir d'un petit morceau de tissu fixé, qui est ensuite coloré, monté dans un milieu d'indice de réfraction approprié sur une diapositive et enfin recouverte d'une lamelle. La préparation de coupes histologiques, implique la procédure suivante:
retrait de l'échantillon:
pour préparer au mieux histologique, le matériel doit être retiré d'un animal anesthésié ou immédiatement après la mort d'un animal. En cas de matériel humain, ce n'est guère possible. Matériel chirurgical représente la meilleure source de tissus humains depuis fréquemment, certains tissus normaux sont enlevée avec un tissu anormal ou malade.
Fixation:
son objectif principal est de préserver le protoplasme avec le moins d'altération de l'état vivant. Fluides Fixateurs actes de préserver protoplasme, inhibent les changements autolytiques et la croissance bactérienne. Ainsi, il doit être effectué rapidement pour éviter la digestion des tissus par des enzymes présentes dans les tissus (autolyse).
La plupart des fluides de fixation coagulent protoplasme, le rendant ainsi insolubles et durcissant les tissus, de sorte que la coupe est facilité. Ils peuvent ou non conserver les glucides et les lipides. Bien fixateur également augmenter l'affinité de protoplasme pour certaines taches. La plupart des agents couramment utilisés sont le formol fixateur, l'alcool et certains acides à savoir l'acide picrique, l'acide acétique et l'acide osmique. Pas de fixation possède à lui seul toutes les qualités souhaitables et de nombreux réactifs sont utilisés dans des mélanges tels que le liquide de Bouin contenant de l'acide picrique, l'acide acétique et de formol et de liquide de Zenker composé de formol, le bichromate de potassium et de bichlorure de mercure. Le choix du fixateur est généralement déterminée par le tissu particulier ou un composé qui doit être étudié et par la méthode de coloration à être utilisé.
Incorporation:
son but est de fournir un soutien rigide pour les blocs de tissus afin qu'elles puissent être coupées en sections minces. Avant l'incorporation, le tissu fixé est lavé, pour enlever l'excès fixateur puis déshydraté par passage à travers la force croissante de l'alcool ou d'autres agents de déshydratation. Ce tissu est ensuite effacé. Ce processus implique la suppression d'agent déshydratant et son remplacement par un peu de liquide qui est miscible à la fois avec l'agent déshydratant et avec le matériau d'enrobage. L'agent de compensation comprend xylol, chloroforme, le benzène et l'huile de cèdre. Après avoir franchi, le tissu est infiltré avec agent d'enrobage, de la paraffine fondue ou d'habitude celloïdine. Après l'infiltration, l'agent d'enrobage est fait de telle sorte que pour solidifier une masse ferme homogène contenant le tissu incorporé est obtenue.
Sectionnement:
tissus inclus en paraffine peuvent être tranché très mince. Pour la majorité des travaux microscopiques, les sections sont entre 3 et 10 um d'épaisseur. Pour couper des sections tel un microtome est utilisé. Chaque section est transférée à une lame de verre propre microscopique, sur lequel un petit œuf d'albumine a été barbouillé. L'eau est dirigée dans la section et faire glisser placé sur une scène de réchauffement. L'eau s'évapore et la section s'installe sur la surface de verre à laquelle il s'attache. La section montée est maintenant prêt prête la coloration.
Coloration:
le but de la coloration est d'améliorer le contraste naturel et à rendre les cellules des tissus et des composants et des matériaux extrinsèques plus évidente. La plupart des taches sont utilisées dans une solution aqueuse et donc de colorer une section de paraffine, il est nécessaire d'éliminer l'agent de paraffine solvant ou de décoration, généralement par xylol. Cette étape est omise dans le cas d'une section qui a été intégré dans celloïdine. La section est ensuite passée à travers décroissant force de l'alcool avant la coloration.
Montage:
après coloration excès de colorant est éliminé par lavage à l'eau ou d'alcool selon le solvant de la teinture et la section est déshydraté par gravir des rampes d'alcool. Suite à l'alcool absolu de la section est transféré à une section de l'agent de compensation. Après le retrait de l'agent de nettoyage, par exemple une goutte de milieu de montage Baume du Canada qui a un indice de réfraction similaire à celle du verre, est placé sur la section et laissé sécher.
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